引言
相较于传统比色法灵敏度低、微量样本误差大、不适配高通量实验的短板，CATG荧光法酶活检测凭借高灵敏度、低背景、可实时定量、操作简便的优势，成为当前主流检测方案。
但很多小伙伴实操时，常因体系配比、孵育条件、对照设置不规范，出现荧光背景干扰大、数值波动、数据重复性差等问题，费时费力还出不了有效结果。
针对以上实验痛点，本期推文整理了一套可直接落地的CATG荧光法酶活完整实操方案，新手可直接套用，老手可优化实验体系，轻松搞定CATG酶活检测！
实验原理
主要仪器与试剂
多功能酶标仪
实验步骤
2．组织预处理： 称取约0.1g样本，加入1ml裂解液进行裂解，10000rpm 4℃离心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待测。
3．CATG 荧光底物溶液配置：80mM CATG荧光底物存储液室温融化后，用CATG Assay Buffer 稀释至200μM的CATG 荧光底物工作液。
4．CATG酶标准品配置：经验证，小鼠新鲜肝脏组织研磨液可作CATG酶标准品。取1份新鲜小鼠肝脏组织，称量、研磨，离心，即获取肝脏组织研磨液上清。试测后选取合适浓度分装冻存，置于-80℃保存，反复冻融不超过1次。
5．单位荧光AMC物质的量计算。取AMC存储液，室温融化。用CATG Assay Buffer稀释，按下表制备AMC标准品溶液。每级稀释，振荡混匀后，再进入下一级稀释。
6．在Immuno 标准板（黑色）板内按100µL /孔依次加入AMC标准品、空白对照（AMC- Blank）。
7．使用多功能酶标仪荧光功能读板，设置激发光波长380nm，发射波长460nm。以读取的AMC荧光底物的荧光值为y轴、AMC荧光底物浓度为x轴直线回归,计算直线回归方程的截距(a)、斜率(b)和相关系数（r2＞0.99）。单位荧光AMC物质的量 pM/RFU= x*100µL/1000000/ Y
8．检测：酶标仪参数设置：动力学循环30min，间隔30s读板，37℃孵育，激发光波长380nm，发射波长460nm在Immuno标准板（黑色）板内按50µL /孔依次加入样本、CATG酶标准品、空白对照（CATG Assay Buffer）。依次向上一步骤孔内加入50µL 200μM 的CATG荧光底物工作液。轻微震荡板子，混匀，立即转入酶标仪读取荧光值。
9．酶活计算：待测样品酶活力pM/min=待测样品Vmax*单位荧光AMC物质的量pM/RFU
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