RSV疫苗体内评价与疫苗研发服务平台

作者：　来源：　日期：2023/12/25 10:09:00　

呼吸道合胞病毒（RSV）是一个非常严重的公共卫生威胁，在全球范围内都有很高的发病率和致死率，威胁人类健康，给社会造成很大的负担。据一项2009-2019年在国内开展的对急性呼吸道感染患者的前瞻性监测研究显示，流感、RSV等是最常见的病毒病原体。在5岁以下儿童中，RSV的检测阳性率高达25.7%，远高于其他呼吸道病毒。每年因RSV感染而住院的5岁以下儿童数量高达21.5万-50.0万。此外，由于免疫力的下降和可能存在的慢性基础疾病，老年人感染RSV的风险也相对较高；极易导致原有病情加重（包括慢性阻塞性肺病、哮喘、慢性心力衰竭等），严重者甚至死亡；据统计，2022年全球65岁及以上老年人RSV严重感染发病人数为860万人，中国为220万人。

1、RSV疫苗研发

自上世纪60年代开始，RSV疫苗的研发工作便已开始进行，然而资料显示，辉瑞此前研发的甲醛灭活RSV疫苗（FI-RSV）在临床试验中并未能有效地预防患儿感染RSV病毒，反而导致了自然感染RSV后呼吸道疾病的加重（ERD，Enhanced respiratory disease）。直到2013年，Pre-F构象被解析后，以Pre-F为基础的RSV疫苗研发进入快速发展阶段。目前，全球在研的RSV疫苗已超过60款，包括GSK、辉瑞、杨森、赛诺菲、阿斯利康、默沙东等多家全球大型制药企业参与其中。FDA在今年5月3日批准了葛兰素史克的呼吸道合胞病毒（RSV）疫苗Arexvy上市，随后在6月1日，辉瑞公司宣布FDA也已批准其呼吸道合胞病毒（RSV）二价疫苗Abrysvo上市。这两款疫苗的目标适用人群都是60岁及以上的群体。RSV疫苗的成功上市和销售业绩表明了市场对预防RSV感染和治疗相关疾病的迫切需求。随着人口老龄化趋势的加剧，老年人对RSV疫苗的需求也会不断增长；同时，RSV疫苗在保护婴儿免受下呼吸道疾病方面也具有重要意义。

2、动物模型在疫苗研发中应用

棉鼠感染模型是RSV药物和疫苗研发常用的一种动物模型。在棉鼠上，我们研究了RSV疫苗的体内免疫原性以及攻毒保护性，免疫程序如图1所示，Day0首次免疫，Day21加强免疫，Day35检测血清中中和抗体滴度，Day38攻毒，攻毒5天后试验终点，检测肺脏病毒载量及肺部病理变化。

图1. RSV疫苗免疫程序

Day35时，利用RSV病毒进行中和抗体检测，血清中中和抗体滴度显示（图2），与NC对照组相比，Vaccine A和Vaccine B两次免疫后均能显著介导针对RSV病毒中和抗体的产生。

图2. 二免后血清中和抗体检测

攻毒5天后试验终点，取右肺上叶用于病毒载量检测，检测方法分别为空斑形成法和绝对定量qPCR法。两种方法均显示（图3），攻毒后，NC对照组肺脏具有较高的RSV病毒载量，与NC对照组相比，Vaccine A和Vaccine B两次免疫后均能显著降低肺脏病毒载量。

图3. 肺脏病毒载量检测

攻毒后，取肺脏用于HE染色病理分析，结果显示（图3），NC对照组动物肺脏存在大量的炎性细胞浸润，Vaccine A疫苗组肺脏炎性细胞浸润明显改善。针对肺脏细支气管、肺小动脉、肺泡、肺泡间质的炎症病理变化进行评分，综合评分结果显示，与NC对照组相比，Vaccine A疫苗组动物肺脏炎性浸润综合评分呈现显著降低趋势(p < 0.05)。

图4. 肺脏HE染色病理分析

除棉鼠感染模型外，我们也建立了小鼠RSV感染模型，并在小鼠上完成了RSV疫苗体内免疫原性评价和攻毒保护性试验，在中和抗体、病毒载量以及肺脏病理变化方面取得了与棉鼠感染模型类似的数据，说明了小鼠RSV感染模型在RSV疫苗研发中具有重要价值。
图5（A）为Vaccine A免疫Balb/C小鼠后，血清中针对RSV毒株的中和抗体滴度，与NC对照组相比，Vaccine A疫苗免疫组动物血清中存在高滴度的中和抗体。图5（B）为RSV攻毒后肺脏病毒载量检测，与NC对照组相比，Vaccine A疫苗免疫组动物肺脏病毒载量显著降低(p < 0.01)。

图5. RSV疫苗体内免疫原性研究。（A）血清中和抗体检测；（B）肺脏病毒载量检测

另外，针对攻毒后小鼠肺脏HE染色进行病理分析，结果显示（图6），NC对照组动物肺脏存在大量的炎性细胞浸润，Vaccine A疫苗组肺脏炎性细胞浸润明显改善。针对肺脏细支气管、肺小动脉、肺泡、肺泡间质的炎症病理变化进行评分，综合评分结果显示，与NC对照组相比，Vaccine A疫苗组动物肺脏炎性浸润综合评分呈现显著降低趋势(p < 0.01)。

图6. 小鼠肺脏HE病理染色分析

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BSL2/ABSL2平台配置了专业的运营和技术团队，包括资深科学家、专职实验人员、专职兽医师、助理兽医师、QA管理体系；工作人员均接受过专业操作的特殊培训，取得相关资质，并在具有疫苗研发经验的科学家的指导和管理下进行相关工作。
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